流式細(xì)胞儀是研究微觀生物最先進(jìn)的科研工具。但是傳統(tǒng)的為臨床醫(yī)學(xué)開發(fā)的流式細(xì)胞儀因?yàn)榉治龉軓捷^小,容易堵塞而無法得到更好的應(yīng)用。因此,結(jié)合長(zhǎng)期的監(jiān)測(cè)經(jīng)驗(yàn)和當(dāng)前用戶需求,荷蘭CytoBuoy系列掃描成像藻類群落分析系統(tǒng),針對(duì)傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀分析水環(huán)境樣品的諸多不足進(jìn)行了技術(shù)突破,使得流式細(xì)胞儀技術(shù)從實(shí)驗(yàn)室走出到野外,可現(xiàn)場(chǎng)原位進(jìn)行更為快捷的藻類檢測(cè)分析和自動(dòng)識(shí)別。是目前在浮游植物監(jiān)測(cè)領(lǐng)域中技術(shù)最先進(jìn)的儀器之一。
測(cè)量原理
樣品中的細(xì)胞和顆粒物在鞘液的流體力學(xué)聚焦作用下高速列隊(duì)經(jīng)過狹窄的噴嘴,在測(cè)量區(qū)液流和激光垂直相交。顆粒經(jīng)過激光時(shí)產(chǎn)生的前向、側(cè)向散射和 葉綠素等色素?zé)晒馔ㄟ^檢測(cè)器收集而進(jìn)一步分析。 基于激光掃描的人工或自動(dòng)粒子數(shù)據(jù)聚類,掃描記錄各種光學(xué)信號(hào)(散射、熒光)的動(dòng)態(tài)變化,可以將不同特征(大小,形態(tài),色素等)藻細(xì)胞聚類區(qū)分開來,利用這些形態(tài)學(xué)信息結(jié)合流動(dòng)成像可以建立浮游植物特征信息數(shù)據(jù)庫(kù),長(zhǎng)期、穩(wěn)定的進(jìn)行海洋生物、淡水生物的監(jiān)測(cè)工作進(jìn)而對(duì)浮游植物詳細(xì)分類, 了解浮游植物的種群變化和水華預(yù)警。
在自然水體中,我們需要關(guān)注的是優(yōu)勢(shì)藻種,正是這些藻種在生態(tài)中其主導(dǎo)作用。對(duì)于定點(diǎn)水域,同樣參數(shù)的散點(diǎn)圖可以以時(shí)間序列來反映水體優(yōu)勢(shì)種類的變化,對(duì)未來的藻華預(yù)警。 在實(shí)際應(yīng)用中,Cyto-XR-PI可以在種群之間進(jìn)行良好區(qū)分。主要用于現(xiàn)場(chǎng)或?qū)嶒?yàn)室自動(dòng)化、快速分析及測(cè)定水體中的浮游生物顆粒,實(shí)現(xiàn)自動(dòng)分類、計(jì)數(shù)等功能。除浮游植物外,還可測(cè)量細(xì)菌、微浮游生物、微型浮游動(dòng)物、單細(xì)胞、菌落、無節(jié)幼體、細(xì)絲、纖毛蟲、食糜、卵、無節(jié)幼體、線蟲、寄生蟲、真菌、糞便顆粒、外聚合物(TEP)、礦物顆粒、微塑料等。
掃描成像藻類群落分析系統(tǒng)在浮游植物監(jiān)測(cè)中的優(yōu)勢(shì)
全粒級(jí)分析范圍,樣本無需過濾分級(jí)
● 可測(cè)定粒徑范圍0.2-700um的浮游植物細(xì)胞或其他顆粒(細(xì)菌、浮游動(dòng)物及沉積物等)。
● 濃度范圍廣,無需對(duì)樣品濃縮、過濾或分級(jí)處理 (102-1011Particles/L) 可直接測(cè)定大粒徑藻細(xì)胞和藻群體(如常見的微 囊藻、棕囊藻群體等)。
● 低剪切力設(shè)計(jì)可測(cè)定易碎顆粒和絲狀藻。(最長(zhǎng) 2.5mm)。
定量光學(xué)檢測(cè),大數(shù)據(jù)實(shí)現(xiàn)藻類識(shí)別
● 前向散射(FWS)表示顆粒大??;紅色熒光FLRed表示葉綠素含量及分布。 紅色熒光與細(xì)胞葉綠素或?qū)?xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的人工染料的含量成正比。
● 激光掃描提供所有信號(hào)的一維形狀信息。
● 剖面掃描信號(hào)的振幅、長(zhǎng)度和形狀由粒子的大小和形狀決定。
● 可獲得葉綠體等“內(nèi)部結(jié)構(gòu)”在顆粒長(zhǎng)度方向上的分布信息,這對(duì)于大于5μm 的藻細(xì)胞很有用。
● 對(duì)于硅藻形成的鏈狀群體,掃描圖中的單個(gè)細(xì)胞顯示為“駝峰”。
● 掃描的形狀不受顆粒旋轉(zhuǎn)方向的影響??蓪?shí)現(xiàn)對(duì)不同物種的數(shù)據(jù)穩(wěn)健聚類,而不受同一物種不同 視角的干擾。
獨(dú)創(chuàng)的脈沖信號(hào)指紋圖譜技術(shù)獲取更多特征信息
● Silico-imaging詳細(xì)記錄細(xì)胞的全部光學(xué)信息,逐個(gè)掃描,不放過自然水體中的稀有藻種。
散點(diǎn)圖聚類,可準(zhǔn)確計(jì)數(shù)每個(gè)亞群
● 每個(gè)粒子的測(cè)量參數(shù)都繪制在細(xì)胞散點(diǎn)圖中(每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)粒子)。
● 在混合培養(yǎng)物或現(xiàn)場(chǎng)自然水樣中,顯示為物理形態(tài)、光學(xué)特性相似的顆粒形成團(tuán)簇,并且可以選擇不同的橫縱坐標(biāo)以區(qū)分不同組并生成每組細(xì)胞生理特性的分布圖。
● 粒子的獨(dú)特性越強(qiáng),分析的分辨力越強(qiáng),出現(xiàn)的團(tuán)簇越多。依此可直接識(shí)別群體和物種。
循環(huán)鞘液系統(tǒng)
● 純凈的再循環(huán)鞘液:循環(huán)鞘液系統(tǒng)可提高數(shù)據(jù)質(zhì)量,保證濃度計(jì)數(shù)可靠。
● 防污染功能(樣品不會(huì)污染流通池),可減少維護(hù)頻率。儀器具有自動(dòng)清洗功能,且不向周圍環(huán)境排放污染物,同時(shí)具有良好的中控室兼容性和擴(kuò)展性。
流動(dòng)成像模塊
● 圖像信息結(jié)合掃描信號(hào),藻類識(shí)別更準(zhǔn)確。CytoSense掃描成像藻類群落分析系統(tǒng)的控制單元同時(shí)接入流式成像和熒光體積監(jiān)控功能,將激光掃描和圖像結(jié)合, 快速激光掃描為高效地收集相關(guān)和有代表性的圖像奠定了基礎(chǔ)。自動(dòng)拍照模式可以以用戶定義的粒子子集的為目標(biāo)進(jìn)行拍照。
● “smart grid” 模式即熒光/散射觸發(fā)模式,可以設(shè)置圖像目標(biāo),作為數(shù)據(jù)分析和自主操作的識(shí)別輔助,自動(dòng)從整個(gè)動(dòng)態(tài)范圍捕獲等量的照片??梢灾粚?duì)藻類顆?;蚱渌l(fā)熒光的物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)識(shí)別與圖像獲取。它有助于在存在大量?jī)?yōu)勢(shì)物種的情況下識(shí)別稀有物種和新興物種。軟件可建立圖庫(kù),并利用建好的圖庫(kù)對(duì)新樣品進(jìn)行自動(dòng)分類和計(jì)數(shù),實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的定性與定量分析。